A 36 éves, 35-szörös olasz válogatott középpályás 1995 és 2013 között a Milant erősítette, amellyel négy bajnoki címet, egy Olasz Kupát, két Olasz Szuperkupát, két Bajnokok Ligáját, két Európai Szuperkupát és egy klubvilágbajnoki címet nyert.
A 2000-es Európa-bajnokságon ezüstérmet szerző középpályás egyéves szerződést kötött a firenzei együttessel.
Ambrosini Fiorentinához szerződése régóta a levegőben lógott, korábban maga a játékos fejtegette, hogy a „violáknál” folytathatja.
„A Fiorentina nagyszerű csapat, fantasztikus edzővel és komoly, nagyravágyó tervekkel. Ha megkeresnének Firenzéből, meghallgatnám, mit ajánlanak” – nyilatkozta korábban Ambrosini.